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    对比爱沃克治疗犬全身性蠕形螨病两种给药方法的效果及安全性
    时间:2018-03-03 编辑: 点击: 正在读取
    摘要: 本实验使用吡虫啉(10%)和莫昔克丁(2.5%)局部滴剂(爱沃克,拜耳)治疗犬全身性蠕形螨病,对比其两种给药方法的效果。16只犬被随机分为数目相同的两组。一组每隔28天给药一次,连用12周,另一组每周给药,连续15周。治疗开始前及之后每隔28天对每...

    摘要:

    本实验使用吡虫啉(10%)和莫昔克丁(2.5%)局部滴剂(爱沃克,拜耳)治疗犬全身性蠕形螨病,对比其两种给药方法的效果。16只犬被随机分为数目相同的两组。一组每隔28天给药一次,连用12周,另一组每周给药,连续15周。治疗开始前及之后每隔28天对每只犬进行体表蠕形螨计数并评估蠕形螨损伤。每周治疗的犬体表蠕形螨数量显著下降,同时相对于每隔28天治疗一次的犬,前者临床症状显著减少、毛发生长增多、体重增加。为评估犬每周用药的安全性,采用每周使用5倍推荐剂量,连用16周。除一只犬在给药部位出现一过性红斑,另一只犬出现皮肤鳞屑,其余未观察到毒性反应。27只犬的血液参数表明安全性试验期间一切正常,除了嗜碱性粒细胞在第13天和第69天高于参考值。

    介绍:

    Zumpt(1961)在文章中提到非洲南撒哈拉地区脊椎动物的蠕形螨感染,并认为蠕形螨是蠕形螨科的唯一种属,同时列举了当时该区域内的五个品种。他坚信应该还存在更多的品种,犬蠕形螨正是引发一些犬严重病理变化的罪魁祸首,而细菌混合感染会加重病情,甚至会导致死亡。Shipstone(2000)提到犬体表有三种蠕形螨,尽管所有的三种均被认为是蠕形螨病的病原,但蠕形螨是该病最常见的病因。正常情况下犬体表微生物群存在少量蠕形螨,幼犬在出生后的几天内从母体获得蠕形螨体,感染没有传染性。但是在某些诱因情况下,如免疫抑制性疾病可能是最常见的,毛囊及皮脂腺中的虫体数量显著增加。虫体数量的增加和表皮的病变组成了蠕形螨病,在犬可能出现严重的表现形式。

    根据犬体表症状严重程度,蠕形螨病分为局灶性或全身性。局灶性蠕形螨病通常见于年轻犬(2岁龄以下),表现为散发的斑块脱毛、红肿以及逐渐自愈(Paradis,1999)。全身性蠕形螨病由局部性蠕形螨病发展而来或发生于年长的动物,后者通常与免疫抑制疾病相关(Shipstone2000)。但是,一些学者认为免疫抑制疾病是由寄生虫的反应引发,所以全身性蠕形螨出现早于疾病发生(Barriga et al.1992)。5个和或5个以上局部皮肤损失即可认为是全身性蠕形螨病,同时也包括整个身体都出现感染,或者两只或更多的足部被感染(Shipstone 2000)。疾病持续6个月以上可认为是慢性全身性蠕形螨疾病(Paradis and Page 1998)。

    目前广泛应用于治疗全身性蠕形螨的方法是每日、每周、每隔14天或每月治疗,坚持治疗2个月甚至更久(Medleau and Willemse 1995;Miller et al.1995;Paradis1999;Wagner and Wendlberger2000)。一些药物使用时需要投入大量人力和时间,往往因为过早停药而使得治疗终止。在回顾治疗蠕形螨的不同方案时,Mueller(2004)总结认为每日口服莫昔克丁(400ug/kg)有良好的效果。即便大环内酯类药物的副反应非常少(Mueller 2004),但这一治疗方法未经官方批准。

    每月使用一次爱沃克对于控制犬蠕形螨有良好效果(Fourie and Heine 2005;Heine et al.2005)。而严重的蠕形螨病例,每月一次的治疗对于动物来说临床症状缓解较慢。为证实该情况,本研究对比每周和每月使用爱沃克,蠕形螨数量的减少和临床症状的缓解。同时监测每周使用的安全性。

    材料和方法

    本研究在位于南非布隆方丹的国际兽医诊所(Clin Vet International)执行。治疗有效性实验遵照良好临床操作指导执行(GCP-GL9 2000),安全性实验遵照OECD良好实验室操作原则。

    治疗有效性评估

    本研究使用一岁以上的10只雄性和6只雌性杂交犬。所有的动物均患有全身性蠕形螨病,每只犬的皮肤刮片均呈现蠕形螨阳性。除了患有慢性全身性蠕形螨病,所有的犬在实验第-1天的临床评估均为正常,体重在6.28到23.09Kg之间,母犬未怀孕。

    每只犬安装电子应答器,内附独特的字母数字代码,之后单独圈养,按照动物福利原则同时设有室内室外通道,动物之间没有接触。动物在使用受试产品的首次治疗前的28天开始适应研究环境。第-28天,每只犬在麻醉状态下接受皮肤活检。伴有继发细菌感染的病例接受为期6周的治疗,每日口服两次头孢氨苄(20-30mg/kg),同时饲喂啤酒酵母支持肠道内菌群。实验第13天进行第二次活检,若没有细菌或炎性细胞出现则停止抗生素治疗。若仍有感染,但炎性细胞和或细菌较之前活检减少很多,则持续4周头孢治疗。如果在第13天发现临床症状和细胞学恶化,则抗生素治疗改为恩诺沙星5mg/kg,并持续4到6周。所有的犬在实验期间每天至少观察一次全身健康症状。

    本研究分为两组进行,每组均有8只治疗动物。考虑到动物福利和已有慢性疾病状况,不宜设置空白对照组。实验第-1天根据动物的体重性别随机分组。按标签使用爱沃克,体重在4-10公斤的犬使用1ml,体重在10-25公斤的犬使用2.5ml。同时实验期间若犬的体重增加至10公斤以上则相应调整产品剂量。根据治疗前的体重为犬给药,在肩胛骨之间滴在健康皮肤处。第一组的动物每隔28天用药一次,用药最多4次。第二组从实验开始每隔7天用药一次,用药最多16次。当第一组某只犬连续两次蠕形螨计数阴性时,治疗即停止,同时该犬至少接受两次治疗。第二组同样情况发生时,犬接受至少8次治疗。

    在第-28天、-2天、+27天和每间隔28天直到+168/9天时,在皮肤损伤边缘或粉刺周围选择五处进行深部皮肤刮片(2-4厘米),评估蠕形螨感染。记录最初刮片位点,之后的检查在这些区域或新损伤处进行。每个刮片转移至已标记且含有矿物油的玻片上,立体显微镜下观察是否有活的蠕形螨。分别记录每个刮片视野中的蠕形螨数量(含未成熟和成熟虫体)。

    刮片当日同时对犬的临床感染症状和蠕形螨损失程度进行评估。以下参数用于评估每只犬和每只犬左右侧的大体情况:皮屑、管型和结痂覆盖的皮肤区域;脱毛皮肤区域(评分1-3,从轻微脱毛至无毛);以及红斑的皮肤区域。实验第-2天对每只动物进行拍照存档,之后每月一次直至实验第+168/9天。

    使用描述性统计绘制评估日蠕形螨的数量和虫体变化的百分比,以实验第-2天的数据作为基线。首先进行单方面评估区分两种治疗方案在评估期间的蠕形螨数量。有效性基于蠕形螨数量(含成熟和未成熟虫体)减少的几何平均数(GM),相对于治疗前的虫体数量,计算方式如下。

    总结每只犬皮肤损伤的数据,包括皮屑、管型、结痂、脱毛和红斑等,并将相关数据统计制表,对比治疗前后临床症状改善的总体性数据性概括。同时还有毛发生长的半定量评估和每只犬在治疗前后不同阶段的相对评分。得分1表示与治疗前相比身体表面毛发再生长率0-50%。2表示毛发生长大于50%同时小于90%。3表示与原始数据相比毛发生长大于90%。

    安全评估

    12只健康的杂交犬,在研究环境下适应7天后进入实验,体重在7.46到18.32kg之间。根据体重将犬分为2组,第1组8只,第二组4只。第一组连续17周每周使用爱沃克治疗,剂量为0.5ml/kg,即5倍推荐剂量。药物直接用于肩胛骨中间的皮肤处。第二组的犬作为空白对照。每只犬室内单独饲养,完全控制环境。

    分别在实验第-1天和第+6天、之后每周采集犬的静脉血进行生化和血常规分析。表1是测量到的参数。

    				表1  安全性评估实验期间生化和血液参数记录值

    临床生化

    血液学

    总蛋白(TSP)g/l

       

    白蛋白g/l

    红细胞计数

    球蛋白g/l

    血红蛋白

    尿素mmol/l

    红细胞压积

    肌苷umol/l

    平均红细胞容积(MCV)

    碱性磷酸酶units/l

    平均红细胞血红蛋白(MCH)

    天门冬氨酸氨基转移酶units/l

    平均红细胞血红蛋白浓(MCHC)

    丙氨酸氨基转移酶units/l

    白细胞计数

    淀粉酶units/l

    白细胞分类计数

    葡萄糖mmol/l

    血小板计数

    钠mmol/l

     

    氯mmol/l

     

    钾mmol/l

     

    磷酸盐mmol/l

     

    钙(总)mmol/l

     

    总胆红素umol/l

     

    直接胆红素umol/l

     

    乳酸脱氢酶umol/l

     

     

    每次治疗后,对犬进行4个小时的仔细观察,之后每隔两天一次。全程观察犬的大体健康状态。分别在实验第-7天、-1、+27、+55、+83和+111天对犬进行临床检查。在实验第-1天记录体重,之后每月称重至实验第+111天。使用评分系统,记录每日食物消耗量。统计分析集中于每个血液学和临床生化参数与基线的变化。变化程度,特别是从临床角度看与变化相关的两个参考范围,命名为参考范围1的由治疗前实验-1天所有组的最小和最大值组成,命名为参考范围2的由病理实验室(Pathcare Veterinary Laboratory,Bloemfontein)提供。治疗后的数值超出参考范围的统计总结列于表中。通过方差分析对比治疗前后的数值与参考值的差异,同样的方法对比不同治疗组治疗前后数值与参考值的差异。

    生物学相关的变化是主要的参考依据,统计学仅仅是辅助评估结果的方法,统计学显著性不是决定性因素。

    结果

    治疗有效性评估

    两种治疗方案对蠕形螨的有效性评估对比列于表2中。每周使用一次爱沃克治疗效果显著优于间隔28天的治疗效果。在实验第+27、+83、+111天的评估中,前者显著由于后者。

    从实验+55天开始,以及在之后的检查中发现,每周治疗的犬红斑出现频率始终少于每隔28天的治疗(表3)。每隔28天治疗的犬中结痂、管型或皮屑的出现频率始终在87.5%和100%间,而从实验第+55天的100%稳定下降至实验+168/9天的37.5%(表3)。8只间隔28天治疗的犬中仅有2只表现出毛发再生长,超过原有毛发覆盖区域的90%。而每隔7天治疗的8只犬中,6只有相同表现(表4)。与全身性蠕形螨相关的皮肤损伤改善的同时两组犬的体重均有增加。在实验第-2天,两组犬的体重平均数几乎接近,而每隔28天治疗的犬最后平均增重2.16kg,每隔7天治疗的犬增重平均4.04Kg。

     

    表2  爱沃克治疗犬蠕形螨病时间隔28天或7天的治疗效果对比

    治疗前后数天

    1组:间隔28天治疗

    2组:间隔7天治疗

    蠕形螨计数的平均值

    有效性(%)

    蠕形螨计数的平均值

    有效性(%)

    -2

    221.7

    -

    423.7

    -

    +27

    144.9

    34.6

    17.0

    96.0a

    +55

    29.5

    86.7

    1.3

    99.7

    +83

    67.2

    69.7

    2.6

    99.4a

    +111

    4.3

    98.0

    1.7

    99.6a

    +139

    41.6

    81.2

    17.7

    95.8

    +168/9

    31.2

    85.9

    11.0

    97.4

    a有效性优先(Wlicoxon-Mann-Whitney)

     

    表3  使用爱沃克治疗蠕形螨病,方法为间隔28天(1组)或间隔7天(2组)治疗时皮肤损伤和体重增加的对比

    治疗前后数天

    频率

    平均体重(kg)a

    红斑

    鳞屑,皮屑

    1组(n=8)

    2组(n=8)

    1组(n=8)

    2组(n=8)

    1组(n=8)

    2组(n=8)

    -2

    8

    5

    8

    8

    12.99

    12.89

    +27

    4

    3

    8

    8

    14.50

    14.71

    +55

    5

    1

    8

    8

    15.23

    15.87

    +83

    6

    1

    8

    7

    15.37

    16.04

    +111

    6

    1

    7

    7

    14.86

    15.99

    +139

    5

    2

    8

    5

    15.09

    16.43

    +168/9

    3

    1

    7

    3

    15.15

    16.93

    a测量日期是实验-1、+27、+55、+83、+104、+126和+168/9天

     

    表4  使用爱沃克治疗蠕形螨病分别以间隔28天或7天治疗时犬毛发生长对比

    治疗数天后

    毛发生长评分:频率

    组1(n=8):间隔28天治疗

    组2(n=8):间隔7天治疗

    1(0-50%)

    2(50-90%)

    3(>90%)

    1(0-50%)

    2(50-90%)

    3(>90%)

    27

    4

    2

    2

    3

    4

    1

    55

    4

    2

    2

    1

    3

    4

    83

    6

    1

    1

    2

    1

    5

    11

    6

    1

    1

    1

    1

    6

    139

    5

    2

    1

    1

    1

    6

    168

    4

    2

    2

    1

    1

    6

     

    安全性评估

    在特殊的健康观察中,一只犬(1组)在前九次给药后的不同时间内给药部位出现了红斑。另一只同组犬在实验第+28、+35和+42天用药部位表现出轻微的皮屑。1组中的两只犬发生两次呕吐。总体来说食物消耗是正常的,同时伴有平均体重增加,1组从实验第-1天的13.24kg增加至实验第+111天的14.46kg。2组从12.79kg增加至12.87kg。

    组内对比表明大部分的病例,特殊治疗组治疗后的数据尤其是血液学参数仍然在参考范围之内。与基线相比,差异显著的数据及某几次差异显著的平均值均列于表5中。组间对比表明大部分的病例,特殊治疗组治疗后的数据尤其是血液学参数仍然在参考范围之内。相对于基线,组间数据变化差异显著。超出参考范围的治疗组的数据列于表6中。

     

    表5 使用爱沃克间隔7天治疗组(1组)或未治疗组(2组),组内对比:显著(p<0.05)是指特殊治疗组与基线相比的变化,该组治疗后平均值超过两个参考范围

    血液学参数

    实验天数

    高/低(相对于参考范围)

    相关组

    嗜碱性粒细胞

    实验+13

    1

    实验+69

    MCHC

    实验+41

    1

    临床生化参数

    实验天数

    高/低(相对于参考范围)

    相关组

    实验+41a

    1

    总蛋白

    实验+55a

    1

    实验+69a

    球蛋白

    实验+48

    1

    实验+62a

    白蛋白/球蛋白比例

    实验+48

    1

    实验+62a

    尿素

    实验+97a

    2

    实验+83a

    2

     

    a超过参考范围1,但仍在参考范围2内

     

    表6 组间对比比较间隔7天给药一次爱沃克的治疗组(组1)及未治疗的对照组(组2):组间的变化差异及超出参考范围的治疗组

    临床生化参数a

    实验天数

    高/低(相对于参考范围)

    相关组

    氯离子

    实验+48

    2

    白蛋白/球蛋白比例

    实验+48c

    1

    尿素b

    实验+76

    2

    实验+90

    2

    实验+97

    2

     

    讨论

    本研究采用的给药方案参考了以前的两个疗效研究,两研究中爱沃克的给药间隔是4周。其中一个实地研究是在欧洲的一个兽医诊所机构进行的,30只治疗犬最后有26只犬体表未检测到蠕形螨(Heine et al.2005)。另一个是实验室研究,蠕形螨数量平均减少了98%。但在实验结束时18只犬中有14只体表仍然有蠕形螨(Fourieand Heine 2005)。除了体表有蠕形螨以外,两个研究中大部分犬的临床症状得到了显著改善。

    现在的研究部分内容与之前的方案重复,如间隔28天治疗,为尝试改进疗效,第二组犬的治疗间隔是7天。结果表明间隔7天治疗组在整个实验期间不仅治疗效果好,同时临床症状缓解更为迅速。间隔28天治疗组在首次治疗后的27天时效果为34.6%,而间隔7天治疗组此时的效果是96.0%,表明后者效果显著良好。间隔7天治疗的犬同时较间隔28天治疗的犬临床症状改善更为快速。在治疗开始后的两个月,间隔7天治疗组中50%的犬表现出毛发生长大于90%,而间隔28天治疗组此时数据为25%。

    本研究的目的不是测试爱沃克滴剂对全身性蠕形螨病犬的治疗疗效,而是说明每周使用比每月使用对于临床和寄生虫症状恢复更为迅速。Paradis(1999)和Burrows(2000)均认为治愈的定义应该是犬在治疗后的至少一年疾病不复发。

    长期频繁使用某些药物使得一些患有全身性蠕形螨病的犬出现了副反应(Paradis 1999;Mueller2004)。本研究中的安全性实验表明,血液学参数的变化并不是器官损伤,而且观察到的临床症状与爱沃克无关。本研究中爱沃克在五倍推荐剂量下使用仍然安全。另有研究表明药物五倍推荐剂量对伊维菌素敏感的柯利犬也是安全的(Paul et al.2005)。

    结论

    爱沃克每周使用一次是安全的,相对于传统的每月一次,每周使用可以快速控制蠕形螨数量,缓解全身性蠕形螨病的临床症状。

    参考文献略

    (摘自《V宠物医师》2017.12.06期)